hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用

本文刊于: 《中国组织工程研究》 2021年第0期

关键词:
干细胞 骨髓间充质干细胞 miRNA 成骨分化 通路 基因 实验

Keywords:
stem cells,bone marrow mesenchymal stem cells,mi RNA,osteogenic differentiation,pathway,gene,experiment
摘要
     背景:研究发现miR-223-3p在骨质疏松患者体内高表达,但其相关机制研究甚少。目的:探讨hsa-miR-223-3p对骨髓间充质干细胞成骨分化的调节作用。方法:Percoll密度梯度离心法分离、培养骨髓间充质干细胞,诱导其成骨分化,然后过表达hsa-miR-223-3p,RT-qPCR和Western blot方法检测Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平变化。构建pmirGLO/Wnt5a-3’UTR和pmirGLO/Wnt5a-3’UTR mut质粒,分别与hsa-miR-223-3p mimics/对照质粒共转染至293T细胞,双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-223-3p与Wnt5a的靶定关系。结果与结论:①随着成骨诱导时间的延长,细胞培养液中碱性磷酸酶水平逐渐增加,茜素红染色可见暗红色或红褐色钙盐结节沉积逐渐增加;②过表达hsa-miR-223-3p后,细胞中Wnt5a、OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平降低;③hsa-miR-223-3p直接靶定Wnt5a的3’UTR区,降低Wnt5a的荧光素酶活性;突变掉Wnt5a的结合位点,靶定作用消失。封闭hsa-miR-223-3p后,野生型Wnt5a的荧光素酶活性增加,突变型Wnt5a的荧光素酶活性不变;④结果表明,在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中,过表达hsa-miR-223-3p可以影响Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的表达。hsa-miR-223-3p可直接与Wnt5a结合,Wnt5a作为hsa-miR-223-3p的下游靶基因,受其负向调控。

基金项目:
国家自然科学基金项目(81171472),项目参与人:肖东琴;四川省科技厅应用基础项目(2016JY0123),项目负责人:肖东琴;四川省科技厅应用基础项目(2018JY0100),项目参与人:肖东琴;南充市市校合作科研专项资金(19SXHZ0099,19SXHZ0236),项目参与人:肖东琴~~

上一篇:胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制
下一篇:人少突胶质前体细胞传代过程中形态学的变化

分享到: 分享hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用到腾讯微博           收藏
评论排行
公告 
相关期刊文献推荐
相关会议文献推荐
相关硕士文献推荐
相关博士文献推荐